阴离子交换色谱法对PCR产物(DNA)的分离和高纯度制备

单分子分析技术和磁镊实验是用来研究核酸、蛋白质、酶反应以及生物分子的单分子水平的动态行为的常用方法。该方法中用到的核酸底物（DNA/RNA）必须是纯度非常高的样品。

在近期发表的一篇关于DNA高纯度制备的研究论文中，层析时使用了无孔阴离子交换填料的色谱柱TSKgel DNA-STAT对DNA（PCR产物等）进行快速分离纯化，来代替以往的分离纯化法。

（论文出自开放获取期刊Open Access）

01 TSKgel DNA-STAT色谱柱分离纯化DNA时的要点:

• 对PCR产物、寡核苷酸（结合有生物素等）连接的DNA底物进行分离、纯化。

• 在60～90分钟内完成对扩增后的PCR产物或DNA底物的分离、纯化。

• DNA样品的ZD载量是100μg。载量为20～50μg时的纯化纯度是95～100%，回收率是70～90%。

02 DNA（PCR产物）的分离示例

图1: 含有发卡和复制叉的1.2 kb insert DNA的结构

色谱柱对PCR产物（DNA）的吸附较强，盐梯度超过0.5 mol/L NaCl时，样品被洗脱。

图2: 洗脱峰5组分的电泳图

Ref.: Y. Lue and P. Bianco, J. Biological Methods, 2021, Vol. 8(1), e415, DOI:10.1440/jbm.2021.350

03 核酸分析用离子交换色谱柱的选择:

东曹生命科学提供的核酸分析专用离子交换色谱柱有TSKgel DNA-STAT (强阴离子交换填料) 和TSKgel DNA-NPR (弱阴离子交换填料) 。这两款色谱柱在填料的粒径、离子交换基团和柱尺寸上略有不同。

TSKgel DNA-NPR采用无孔亲水聚合物基质填料，对质粒DNA的三种立体异构体oc、sc/cc、linear可实现高分辨率分析。而TSKgel DNA-STAT在样品载量上更具有优势，如果考虑实验室级别的分离纯化，操作压力较低的TSKgel DNA-STAT则更适合。